猪细小病毒氢氧化铝疫苗研究

选用从国内浙江省某猪场流产死胎中分离的猪细小病毒强毒（简称浙PV－Z株），通过仔猪肾原代细胞增殖后，经甲醛灭活，再配以20％的氨氧化铝胶佐剂制成猪细小病毒氢氧化铝疫苗。该疫苗免疫性好，免疫程序简单。小剂量肌注豚鼠和猪，均能激起明显的抗体应答反应，疫苗对豚鼠接种2次HI价可达到1：320以上（通常1：640－1：1280）。对成年猪接种疫苗0．2ml,0.5ml,1.0ml免疫2次，或用2．0ml免疫1次，HI价范围在1：20－1：320之间，疫苗对胎儿的保护率可达到98．7％。实验室和田间跟踪试验显示该疫苗具有保存期长、耐热、安全、免疫保护率高等特点。     

怀孕后期感染PRRS病毒母猪所产新生仔猪的免疫反应

将PRRS病毒BJ－4株感染怀孕后期（约90天）的抗体阴性和阳性母猪，待自然分娩后，观察新生仔猪的免疫应答。结果显示，接种PRRS病毒BJ－4的母猪没有表现出明显的临床症状，没有出现流产死产。新生仔猪浦被子前血清中PRRS病毒核酸TR－PCR检测和ELISA抗体阴性，哺乳后特异性抗体出现，5－6周母源抗体逐渐下降；20日龄猪瘟疫苗免疫后疫苗抗体维持时间短，仔猪在40日龄后进入野毒感染的危险期。RT－nested PCR检测血清中PRRS病毒核酸和易感仔猪病毒特异性抗体监测的结果提示仔猪群内可能存在水平传播。流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群发现CD3^ 细胞减少，CD4^ 细胞显著下降，CD8^ ，CD4^ CD8^ 和SLA－DR^ 表达细胞升高。以上结果表明在感染后病毒能够长期持续性存在，猪场内新生仔猪母源抗体逐渐下降后，通过水平传播受到感染，感染后免疫应答受到不利影响。     

猪胚胎干细胞的分离克隆

本文从分化抑制物、培养基的选择内细胞团的分离,胚胎干细胞的分离及鉴定方法等方面系统地综述了猪胚胎干细胞分离克隆的研究进展;并对其未来的应用前景进行展望。     

PRRS ELISA试剂盒检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的应用

利用重组杆状病毒表达的PRRSV核衣壳蛋白作抗原制成ELISA诊断试剂盒，检测人工感染PRRSV猪血清、疫苗免疫抗体和田间血清，并与IDEXX公司生产的试剂盒进行比较。结果表明，该试剂盒在PRRSV感染后8天内就可检出感染性抗体，而用IDEXX公司生产的试剂盒在感染后的18天才检测到感染性抗体，对弱毒疫苗的免疫检测也基本能反映出疫苗的免疫应答状况。对华东地区PRRSV流行病学调查结果表明，PRRSV在国内普遍存在，同时也证明研制的试剂盒，是客观科学调查我国PRRS流行情较理想的检测工具。     

猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究

PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3．1（＋），构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游，使二者融合表达，命名为pCORF2BVP22和pCBVP220RF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠，分别注射pCDNA3．1（＋）、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP220RF2，共免疫2次，间隔2周，分别于首免后2周和二免后4周采血，ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达，将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体，构建了pNORF2和pNBVP22，转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示，通过两次免疫后，各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体，同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果，其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。     

2011年-2013年滨州及其周边地区4种猪病毒性疾病的流行情况分析

通过对滨州及其周边地区2011年-2013年316个场次采集病料进行猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒与猪圆环病毒2型的检测,并对检测结果进行了统计分析,了解滨州及其周边地区上述4种疫病的流行状况。     

PCV2衣壳蛋白羧基端基因在T4噬菌体表面的展示及ELISA方法的建立

用PCR扩增猪圆环病毒Ⅱ型广东分离株的衣壳蛋白羧基端基因,将PCR产物连接到pR质粒,转化DH5α细胞,筛选阳性克隆进行PCR鉴定并测序后,转化E2菌,将重组E2菌与缺陷型噬菌体T4-Z1同源重组后,得到重组噬菌体,经SDS-PAGE和Western blotting分析,表明衣壳蛋白片段在噬菌体表面正确展示,表达的融...     

福建地区2株猪嵴病毒 VP1基因的克隆及遗传进化分析

[目的]调查猪嵴病毒在福建地区腹泻猪群中的流行和变异情况。[方法]根据Gen Bank中登陆的猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKo V)结构蛋白VP1基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR方法从某猪场采集腹泻小肠样品中扩增猪嵴病毒VP1基因,将扩增后的目的片段克隆后进行序列测定。应用生物信息学软件,将获得的2株猪嵴病毒VP1和Gen Bank的猪嵴病毒株VP1基因序列进行对比分析。[结果]猪嵴病毒CH/FJNP/12L/2015与匈牙利株K-30-HU/2008/HUN(GQ249161)的核苷酸同源性最高,为88.1%,氨基酸同源性为95.3%。CH/FJNP/12W1/2015与越南株714441/CAOLANH-VH/2012-2-21(KT266058)的核苷酸同源性最高,为88.2%,氨基酸同源性为96.1%,同源重组分析显示,2株毒株均无明显同源重组发生。[结论]频繁的畜禽国际贸易,以及如今便捷的现代化交通工具,人们生活提供方便的同时,也加速了猪嵴病毒毒性的传播。     

一例猪圆环病毒病继发链球菌的诊治

猪感染圆环病毒后,因免疫系统遭到破坏而容易继发其他疾病,如果猪圆环病毒病继发感染链球菌,对养猪业危害巨大。2019年4月年对辽宁地区某规模化猪场发生的疫情进行了实验室诊断,并根据检测结果提出了治疗方案,疫情得到控制。     

猪流行性腹泻病毒山西分离株ORF3基因序列分析

为了研究山西地区猪流行性腹泻病毒ORF3基因的遗传变异情况,2014-2015年从山西地区11个地市收集的PEDV阳性病料中扩增到4株PEDV的ORF3基因,并进行序列比对及遗传分析。序列分析结果表明,4株PEDV山西分离毒株的ORF3基因与CV777毒株相比,无核苷酸插入和缺失,有部分核苷酸及氨基酸发生变异;4株PEDV山西分离毒株的ORF3基因之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.6%~100.0%和98.7%~99.6%,与CV777、疫苗株CV777 truncated和attenuated DR13核苷酸同源性分别为96.6%~97.0%,90.6%,97.6%~98.1%,氨基酸同源性分别为95.1%~96.0%,88.0%,97.1%~98.1%。遗传进化分析结果显示,4株PEDV山西分离毒株与12株2010-2015年我国各地方分离的毒株和2009年分离的CH/JL/09毒株亲缘关系较近;与CV777、LZC、Brl/87和2个疫苗株(CV777truncated和attenuated DR13)亲缘关系较远。